Présidents de session
Travaux Pratiques 3: Construction d’un microscope confocal pour le couplage à un AFM commercial
- Luca COSTA
Description
L’objectif de ce TP est de de construire un microscope confocal basé sur un microscope inversé, pour le couplage à un AFM commercial pour réaliser des mesures corrélatives AFM-fluorescence.
Les étudiants assembleront sur une table optique la voie d’excitation du microscope, qui comprendra une source laser, des miroirs et un système de lentilles permettant de collimater le faisceau dans le plan focal arrière de l’objectif du microscope, pour attendre un faisceau focalisé et diffraction-limited sur l’échantillon. Les étudiants apprendront à aligner les différents éléments optiques. La fluorescence émise par l’échantillon sera collectée par le même objectif puis dirigée vers une voie de détection. Après séparation de l’excitation et de l’émission par des filtres dichroïques, la lumière hors plan focale sera rejetée à l’aide d’un pinhole. Le signal de fluorescence sera ensuite focalisé sur un photodétecteur à avalanche la détection des photons.
L’acquisition des images de fluorescence sera réalisée en gardant le point d’excitation fixe dans l’espace et en déplaçant l’échantillon à l’aide d’une platine motorisée. Dans une seconde étape, les images de fluorescence obtenues seront corrélées avec des images AFM. Selon le temps disponible, cette corrélation sera réalisée soit avec un AFM directement monté sur le microscope inversé, soit avec un AFM installé sur une plateforme distincte.